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病毒研究用水系列三:如何获得完美的核酸电泳条带

浏览次数:129发布日期:2020-07-03

在病毒的分子生物学研究中,电泳技术是一个重要方法,主要用于核酸、蛋白质的分离与鉴定,使用的实验仪器主要是电泳仪。本文,乐枫纯水为大家总结了实验中常出现的问题和解决方法。

<span class='bjFfcClass' style='color:red' >新冠</span>病毒研究仪器用水

一、什么是核酸电泳?

    核酸电泳是基因操作的核心技术之一,用于分离、鉴定DNA、RNA 分子混合物和纯化DNA的片段。

二、核酸电泳异常条带问题 

    核酸电泳实验中,常常会遇到条带模糊、拖尾、扭曲等现象,究其原因,除了操作不当,电泳条件未优化,电泳缓冲液也是重要的影响因素之一。电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率。

异常电泳条带

 

表1 核酸电泳条带异常的原因汇总及建议的解决方法

 

常见问题

原因

解决方法

条带模糊

核酸降解

使用不含核酸酶的超纯水配置缓冲液

电泳缓冲液陈旧

建议经常更换缓冲液

有蛋白污染

使用低有机物的超纯水配置缓冲液

核酸变性

使用超纯水或者缓冲液稀释样品

条带黯淡

核酸浓度过低

增加上样量

核酸降解 

使用不含核酸酶的超纯水配置缓冲液

条带被示踪染料掩盖

避免使用与目的片段迁移率相同的示踪染料

拖带或涂抹带

PCR体系或PCR程序不合适

优化PCR体系和PCR程序

条带扭曲

配胶缓冲液和电泳缓冲液不同

配胶和电泳中使用同一批缓冲液

电泳时电压过高

控制电泳时电压不超过6V/CM

三、核酸电泳用纯水要求

    为了防止水中杂质(如:核酸酶、蛋白质、离子等)对电泳结果的影响,核酸电泳实验配置缓冲溶液或稀释样品需要使用超纯水:

● 电阻率 18.2 MΩ·cm

●TOC < 10 ppb

● 无核酸酶

● 细菌总数< 1 CFU/mL

● 热原< 0.005 EU/mL

● 0.22 μm 或更低的颗粒过滤

四、核酸电泳用纯水机推荐

    乐枫生物新一代Genie系列智能纯水系统是一款专注于解决用户需求的实验室纯水机。Genie系列智能纯水系统采用乐枫的理念——无线连接、“1+N”模式,具有系统智能化、设计人性化、水质标准化三大特色。

广州某疾控中心安装的Genie G

广州某疾控中心安装的Genie G以自来水为进水产EDI纯水和超纯水

荷兰安装的Genie U

荷兰安装的Genie U以自来水为进水产RO纯水和超纯水

稳定可靠的水质

• 集合优化的流路设计的 EDI 模块和乐枫LeFil 和OrganeFil 配方填料的超纯化柱,纯水和超纯水水质达到或超过相关实验室用水标准;

• 配备RephiBio 终端过滤器,可有效去除水中的热原(内毒素)、核酸酶、细菌等杂质,满足核酸电泳实验用水要求。

用户体验

• 触控屏采用高灵敏度防水屏幕,可带乳胶手套操作

• 采用智能IT技术,取水手柄与主机可无线连接,取水点与主机的距离不受电线长度的限制,让您享受“无线 · 自由”的用水体验;

• 远程取水终端的手柄设计符合人体工学,升降只手操作;亦可实时查看水质信息,完成手动取水或定量取水等操作

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